薄層色譜儀是專為薄層色譜(或類似薄層色譜)配套的儀器,它較好地運(yùn)用了現(xiàn)代數(shù)碼照相技術(shù)和圖像定量分析軟件,將薄層色譜中的信息定性與定量準(zhǔn)確地反映出來??蓪Ρ由V圖譜進(jìn)行即時(shí)觀察、即時(shí)拍照、即時(shí)保存、即時(shí)定量分析,報(bào)告各種定量數(shù)據(jù)。
薄層色譜儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的具體步驟:
1.薄層板制備
除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2-0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用,用前檢查其均勻度。
2.點(diǎn)樣
除另有規(guī)定外,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
3.展開
展開室如需預(yù)先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm,密封室蓋,待展開至規(guī)定距離,取出薄層板,晾干,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測。
4.如需用薄層色譜儀對色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點(diǎn)作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進(jìn)行比較并計(jì)算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。